Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS) - Fluorescence Cross-Correlation Spectroscopy (FCCS)

Principe

Ces deux techniques de microscopie sont basées sur la corrélation des fluctuations de signaux de fluorescence provenant des fluorophores illuminés dans un volume fixe et bien défini dans le temps. Pour la FCS ces signaux sont corrélés à eux même permettant alors d'extraire des paramètres décrivant le comportement diffusif de la protéine. Dans le cas de la FCCS on corrèle les fluctuations d'un fluorophore à un autre présent dans ce même volume. Il est alors possible de savoir si deux protéines sont potentiellement en interaction.

Equipement disponible

Sur ImagoSeine il est possible d’effectuer de mesures de FCS avec les microscopes confocaux Zeiss LSM 710, LSM 780 et avec le système Microtime.
Le LSM710 est couplé au module Confocor, qui dispose de 2 détecteurs APD (photodiode à avalanche) fonctionnant en régime comptage de photon unique. Le LSM780 dispose de détecteurs GaAsp qui peuvent fonctionner en mode comptage de photon unique.
Le MicroTime est équipé d'un laser bleu pulsé et d'un laser vert continu et de 2 APD. Pour éviter le cross-talk entre les deux canaux, un filtre statistique permet de séparer les deux types de signaux par la nature de l'excitation : pulsée ou continue. Une chambre thermostastée préserve l'échantillon vivant tout au long des acquisitions.

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