Durée de vie de fluorescence (FLIM & FRET)

Principe

La durée de vie de fluorescence d'un fluorophore est un paramètre qui peut mettre en évidence des différences dans l'environnement (pH, état redox, . . .) entourant la protéine qui y est accrochée.
Parmi ces différences on peut y inclure une interaction avec une protéine fusionnée à un autre fluorophore, on parle alors de la technique de FLIM-FRET. Le FRET (Foerster Resonance Energy Transfer) a lieu quand 2 fluorophores sont très proches (<10nm) l'une de l'autre, il y a alors transfert d’énergie. Ce dernier peut être détecté soit par différence d’intensité de fluorescence soit par difference de la durée de vie. La 2eme méthode peut être souvent plus précise et plus adaptée pour quantifier le taux de transfert.

Equipement disponible

Le MicroTime (PicoQuant) est un système confocal équipé d'un laser blanc pulsé ce qui permet d'avoir une gamme étendue dans le choix des longueurs d'ondes d'excitation. Dans la partie détection, deux SPAD (photodiode à avalanche) rendent possible l'acquisition simultanée de deux spectres d'émission différents si nécessaire. Enfin, une chambre thermostatée préserve l'échantillon vivant tout au long des acquisitions.

Retour en haut de page