Equipement CLSM

Le microscope confocal agit comme un microtome optique, son principe consiste à placer un diaphragme (pinhole) qui arrête tout signal ne provenant pas du plan focal devant le détecteur. Cela permet d'obtenir une image d'un plan focal (coupe optique) sans couper l’échantillon et avec une définition bien supérieure au microscope conventionnel. La fluorescence provenant des plans adjacents au plan focal est pratiquement éliminé. Il en résulte une très bonne sensibilité de détection, une augmentation du contraste et une "clarification" des images par rapport à la microscopie plein champ.
Le microscope confocal est particulièrement adapté pour
- les acquisitions en 3D,
- les études de colocalisation,
- l’étude des dynamiques moléculaires par photoblanchiement, photoactivation ou photoconversion,
- la visualisation de fluorochromes, même lorsque leurs spectres d’émission se superposent grandement,
- les études de FRET.

Equipements disponibles

La plateforme possède 3 équipements de microscope confocal à balayage laser :

  • TCS SP5 (Leica) :

- Statif DMI6000
- Lasers: Diode Laser raie à 405nm (25mW); Argon raies à 458, 476, 488 (40mW) 496 et 514nm; Diode laser raie à 561nm (15mW); Hélium néon raie à 633nm (10mW)
- 3 détecteurs PMTs pour la fluorescence (possibilité d'acquisition spectrale)
- 1 détecteur Hybride très sensible pour diminuer le photoblanchiment.
- 1 détecteur PMT en transmission pour des acquisitions en brightfield et contraste interférentiel de Nomarski (DIC)
- Système "Resonant Scanner" activable pour des acquisitions très rapides.
- Platine motorisée en XY pour des acquisitions multi-position et mosaïque
- Motorisation en Z et platine galvanométrique;
- Enceinte contrôlée en température et CO2
Objectifs disponibles sur le microscope confocal TCS SP5

  • LSM 710 (Zeiss) :

- Statif Axio Observer Z.1
- Lasers: Diode Laser raie à 405nm(30mW); Argon raies à 458, 476, 488 (25mW) 496 et 514nm; DPSS raie à 561nm(15mW); Hélium néon raie à 633nm (5mW)
- 2 détecteurs PMTs pour la fluorescence
- 1 détecteur spectral pour des acquisitions spectrales en temps réel)
- 1 détecteur PMT en transmission pour des acquisitions en brightfield et contraste interférentiel de Nomarski (DIC)
- Platine motorisée en XY pour des acquisitions multi-position et mosaïque
- Motorisation en Z
- Enceinte contrôlée en température et CO2
Objectifs disponibles sur le microscope confocal LSM710

  • LSM 780 (Zeiss) :

- Statif Axio Observer Z.1
- Lasers: Diode Laser raie à 405nm(30mW); Argon raies à 458, 476, 488 (25mW) 496 et 514nm; DPSS raie à 561nm(15mW); Hélium néon raie à 633nm (5mW)
- 2 détecteurs PMTs pour la fluorescence
- 1 détecteur spectral GaAsP plus sensible pour des acquisitions spectrales en temps réel
- 1 détecteur PMT en transmission pour des acquisitions en brightfield et contraste interférentiel de Nomarski (DIC)
- Platine motorisée en XY pour des acquisitions multi-position et mosaïque
- Motorisation en Z
- Enceinte contrôlée en température et CO2
- Système d’Autofocus intégré (Definite Focus) pour éliminer la dérive en Z
Objectifs disponibles sur le microscope confocal LSM780

Tutoriel

Tutoriel vidéo (en Anglais) sur ibiology.org.

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